Phenomenex Gemini NX C18色谱柱测定17种氨基酸
实验室没有自动氨基酸分析仪，通过柱前衍生建立了HPLC测定种游离氨基酸。
1.仪器与试剂
氨基酸混合标准品，购自中国计量科学研究院，碳酸氢钠，二硝基氟苯，磷酸二氢钾，DMF(N,N-二甲基甲酰胺)，乙酸钠均为分析纯，乙腈为色谱级，超纯水。Phenomenex Gemini NX C18(4.6 mm×250 mm, 5 μm)，液相色谱仪配置UV检测器(LC-20AT)日本岛津。
液相色谱条件。流动相：A为0.05 mol/L乙酸钠(pH=6.4，含0.1% N,N-二甲基甲酰胺和10%乙腈)，B为乙腈:水(体积比为1:1)；流速：1.0 mL/min；柱温：35 ℃；检测波长：360 nm；进样量：10 μL，梯度洗脱。梯度洗脱：0-8 min:(82%A)，8-14min(72%A)，14-34min(72%A)，34-35min(68%A)，35-40min(68%A)，40~41min
(40%A)，41-60min(5%A)，后面加一个平衡柱子的程序。
2.标准品处理
取混合标准溶液0.1 mL于10 mL容量瓶中，加入0.5 mL 0.5 mol/L NaHCO3溶液，调pH到8.5，加入0.5 mL 1%二硝基氟苯衍生化试剂，混匀后60 ℃恒温水浴60 min，然后用0.1 mol/L KH2PO4试液定容至10 mL，上机检测。植株样品，称取一定量的样品，水回流提取0.5-1h,按照标准品步骤进行衍生，然后上机测定。
3.实验结果：
采用柱前衍生法测定植株中的游离氨基酸，采用液相色谱法进行检测，由图1可知，各氨基酸对应的峰分离效果较好
图1 游离氨基酸液相色谱图,(1:天冬氨酸；2:谷氨酸；3:丝氨酸；4:甘氨酸；5:精氨酸；6:苏氨酸；7:脯氨酸；8:谷氨酸；9:缬氨酸；10:甲硫氨酸；11:胱氨酸；12:异亮氨酸；13:亮氨酸；14:苯丙氨酸；15:组氨酸；16:赖氨酸；17:酪氨酸)
总结：使用Phenomenex Gemini NX C18色谱柱对于测定和分离17种游离氨基酸非常好用，没有经费置办氨基酸分析仪的可以选择这种方法进行测定，色谱柱比较耐用，峰型分离比较好。
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